3.3.3 cultivos de ápices meristematicos

3.3.3 cultivos de ápices meristematicos

La regeneración de plantas sanas partiendo de cultivos in vitro de ápices meristemático de ciertos vegetales exige la búsqueda de técnicas complejas y su empleo acertado. Estas técnicas permiten al explante sortear frecuentes dificultades como la oxidación, la heterogeneidad de respuestas, la reversión al estado juvenil, la presencia de inhibidores de enraizamiento y sobre todo la sobrevivencia al trasplante en condiciones autótrofas. Buscando la mejor respuesta del ápice meristemático de algunos plantas Murashige et al. (1972) y Navarro et al. (1975) plantearon la posibilidad del microinjerto in vitro de ápices sobre plántulas provenientes de semillas, logrando así el desarrollo de plantas libres de numerosos virus. Una técnica denominada “microinjerto in vivo” de ápices meristemático pretratados in vitro, fue propuesta por Mosella et al. (1980), con esta técnica se lograron obtener plantas sanas de Prunus pérsica L. Batsch y son menos complicaciones que con la técnica original in vitro. En 1983, Ascui aplico estos nuevos procedimientos a diversos cítricos y obtuvo resultados promisorios que esperan los indizajes virológicos correspondientes.

Para la obtención de ápices meristemático

El ápice meristemático mide de 0.2 a 0.4 mm en cítricos [(Citrus sinensis L) Osbeck cv. Thomson y (Citrus limón L) Burm f. cvs. Genova, Eureka y Lisboa] y de 0.6 a 1 mm en el duraznero (P. pérsica cv. GF 305); comprende el meristema propiamente dicho y uno o dos primordios foliares. El meristemo se obtiene de los brotes terminales de plantas mantenidas en el invernadero o de plantas cultivadas de 2 a 3 años en el campo, si se trata de cítricos. Los brotes se esterilizan superficialmente con etanol 80% (v/v) durante 2 a 3 min y luego durante 10 a 15 min con hipoclorito de calcio (6% - 9%) que contenga 0.1% de Tween-20. Luego los brotes se lavan con agua destilada tres o mas veces. La operación se realiza con ayuda de un binocular de 20 aumentos en una cámara de flujo laminar.