2.3.4.1 DESINFECCIÓN DEL EXPLANTE

2.3.4.1 DESINFECCIÓN DEL EXPLANTE

Realizar una adecuada preparación de la planta dadora de explantes, cultivándola preferentemente en invernaderos tratadas con productos químicos que eliminen patógenos y eventuales microorganismos endófitos.

Los explantos deben ser esterilizados antes de ser establecidos en condiciones de cultivo. Protocolo del tipo de esterilización superficial de material vegetal son:

- Lavado con agua corriente durante 20-30min

- Etanol 70%, entre 5 y 10 seg.

- Solución de hipoclorito de sodio (NaCIO) de 5 a 20%, entre 5 y 30 min. Este paso puede ser reemplazado por el uso de soluciones diluídas de bicloruro de mercurio (HgCl2), entre el 0,01 y 0,05%. soluciones diluídas de bicloruro de mercurio (HgCl2 ), entre el 0,01 y 0,05%.

- Enjuagues con abundante H2O estéril (4 ó 5 veces).

- En el caso del HgCl2 , el material se debe enjuagar sucesivas veces pues es difícil de eliminar.

Lavado inicial con detergente para eliminar las partículas e impurezasmás grandes, seguido de una inmersión en alcohol de 95º; posteriormente unadesinfección inicial con NaOCl más fuerte que la segunda (también en NaOCl), y 3lavados con agua destilada estéril después de cada desinfección con NaOCl paraeliminar los restos de los compuestos químicos. El alcohol de 95º, además de servircomo agente bactericida, se utilizó como surfactante para que los tejidos fueranfácilmente penetrados por los siguientes germicidas (el NaOCl en este caso). Laprimera desinfección con NaOCl se utilizó siempre en mayor concentración que lasegunda, pues el tejido inicial (hojas superficiales del brote lateral entero) requeríauna desinfección sin importar el daño de ese tejido, ya que no era el explante deinterés; además, por tratarse de un brote cerrado, el contacto del alcohol y del NaOClde la primera desinfección difícilmente alcanzó el meristemo apical. La segundadesinfección con NaOCl se utilizó siempre en menor concentración respecto de la primera, pues ya para el momento de su realización, se habían eliminado algunas hojas.