seleccion de plantas donaroras
establecimiento aseptico
multiplicacion
enraizamiento
adaptacion o aclimatacion
martes, 30 de octubre de 2012
2.3. ESTABLECIMIENTO EL CULTIVO DE TEJIDOS
2.3.
ESTABLECIMIENTO EL CULTIVO DE TEJIDOS
La
propagación de plantas in vitro es una técnica muy utilizada en cultivos de
importancia económica. Permite cultivar células, tejidos, órganos, semillas,
embriones y obtener individuos selectos en forma rápida. Los cultivos son
realizados por personal especializado en medios específicos (hormonas,
minerales, vitaminas, fuente de carbono, agente gelificante, agua, etc.) y
condiciones ambientales controladas (temperatura, humedad y luz)
2.2. ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL DE CRISTALERÍA Y OTROS MATERIALES
2.2.
ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL DE CRISTALERÍA Y OTROS MATERIALES
Calor
Húmedo
El
calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos
efectos se deben principalmente a dos razones:
El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua.
El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua.
AUTOCLAVE
Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión. El modelo más usado es el de Chamberland.
Esteriliza a 120º a una atmósfera de presión (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos.
Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión. El modelo más usado es el de Chamberland.
Esteriliza a 120º a una atmósfera de presión (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos.
Equipo
Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metálica, que en la parte inferior recibe calor por combustión de gas o por una resistencia eléctrica.
La caldera se cierra en la parte superior por una tapa de bronce sujetada por bulones, mariposas o charnelas. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manómetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete (también llamado espita) y el tercero, para una válvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte.
Tiempos de esterilización en autoclave
Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metálica, que en la parte inferior recibe calor por combustión de gas o por una resistencia eléctrica.
La caldera se cierra en la parte superior por una tapa de bronce sujetada por bulones, mariposas o charnelas. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manómetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete (también llamado espita) y el tercero, para una válvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte.
Tiempos de esterilización en autoclave
Del
tiempo, temperatura y presión usadas en la esterilización depende el éxito
alcanzado. Generalmente los datos presión y temperatura son fijados, y el único
factor que se varía es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos
de esterilización dependiendo de su textura, porosidad, y otras características
propias de cada material. Algunos materiales como el hule, necesitan poco
tiempo, mientras otros como el metal quirúrgico necesitan más. 2.2.7 esterilización de medios de cultivos
ESTERILIDAD
DEL MEDIO Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para
evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso
impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en
dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)
2.2.5 ESTERILIZACIÓN CON CALOR HÚMEDO
2.2.5
ESTERILIZACIÓN CON CALOR HÚMEDO
El
calor húmedo destruye los microorganismos por coagulación de sus proteínas
celulares. El principal método de esterilización que emplea calor húmedo es la
esterilización por vapor a presión. Existen otros métodos de descontaminación
que emplean este tipo de calor los cuales, aunque no permiten la destrucción
total de los microorganismos, disminuyen la carga microbiana que posee un
material.
El
calor húmedo es la forma de vapor saturado a presión es eficaz parala
destrucción de todas las formas microbianas, incluso espora. La muerte de las
bacterias es causada por la desnaturalización y coagulación de su proteína o su
sistema intercelular enzima-proteína. Estas reacciones son catolizadas por
medio del agua. Estas pueden de dos tipos:
Calor
húmedo discontinuo: algunos medios de cultivo que contiene carbohidratos como
lagelatina, leche, etc. no soportan temperaturas elevadas y se realiza mediante
los siguiente procedimientos:
Tindalización:
hace uso del calor húmedo, para una buena esterilización se deberealizar a
100ºC por ½ hora (por tres veces discontinuas) durante 1 día.
Ebullición:
es el paso de un líquido al estado de vapor. El agua en ebullición representaen
forma eficaz y práctica de proporcionar una desinfección de alto nivel
deinstrumentos y guantes que entren en contacto de las membranas mucosas, si
bien alhervirlos por 20 minutos se aniquilan todas las formas vegetativas de
las bacterias, losvirus, las levaduras y los hongos, pero no destruye a las
esporas.
Pasteurización:
elimina a todos los microorganismos no esporulados se puede variar
lastemperaturas por ejemplo: 62ºC por 30 min.; 70ºC por 15 min. Se utiliza para
preservar alimentos como ser leche, cerveza.
Entre
estos métodos podemos citar:
•
Tindalización (esterilización fraccionada)
•
Agua hirviendo
•
Pasteurización
•
Olla de presión
Esterilización
por vapor a presión
La
esterilización por vapor a presión se lleva a cabo en un autoclave. Estos
equipos emplean vapor de agua saturado, a una presión de 15 libras lo que
permite que la cámara alcance una temperatura de 121ºC. El tiempo de
esterilización usualmente es de 15 minutos, sin embargo, en algunas
oportunidades, dadas las características del material, es necesario variar el
tiempo de esterilización. Cuando se utiliza este método es importante controlar
en el autoclave la relación entre la temperatura, la presión y el tiempo de
exposición, ya que éstos son factores críticos en el proceso. Sólo cuando el
vapor se coloca bajo presión, es cuando su temperatura aumenta por encima de
los 100ºC y esto permite alcanzar las temperaturas de esterilización (121ºC).
Entre
las ventajas de este método de esterilización tenemos que no deja residuos, los
autoclaves modernos son sencillos de manejar y es un método rápido de
esterilización. Éste es el método de elección para esterilizar materiales
termoestables y no sensibles a la humedad como medios de cultivo, cultivos de
microorganismos para descartar, lencería, uniformes, instrumentos quirúrgicos,
etc. Esta forma de esterilización es segura y económica, no deja residuos
tóxicos, es rápida,es cómoda, ya que los
autoclaves son automáticos.
Entre
sus desventajas están que no permite la esterilización de materiales sensibles
al calor y materiales no miscibles con el agua como es el caso de polvos,
aceites y grasas. Corroe los materiales metálicos, estropea los cortes,
deteriora los materiales de goma o plástico, requiere mucho tiempo para la preparación
de paquetes, bultos y también requiere mucho cuidado en la carga del autoclave.
Materiales
que pueden esterilizarse por calor húmedo:
Textiles
secos: (ropas, vestidos, paños, gasas, algodones).
Materiales
duros: (envases, bateas, contenedores, etc).
Materiales
que no pueden esterilizarse por calor húmedo:
Todos
los que contengan sustancias grasas (gasas furanizadas,). (materiales termo
sensibles como gomas y plásticos).
2.2.4 FACTORES QUE INTERVIENEN EN EL PROCESO DE ESTERILIZACIÓN
2.2.4
FACTORES QUE INTERVIENEN EN EL PROCESO DE ESTERILIZACIÓN
Como
es bien conocido, el éxito en el logro de esterilidad en cualquier preparación
depende de muchos factores, como son la naturaleza de la sustancia que se
esteriliza, el volumen contenido en cada unidad, el tamaño del recipiente y el número
de unidades que se puedan manejar en una sola operación. Por consiguiente, no
se pueden dar instrucciones especificas relacionadas con el método de
esterilización que se utiliza para una preparación individual; en
contraposición, se presentan sugerencias generales relacionadas con los
procedimientos de esterilización.En los métodos físicos de esterilización
encontramos que la Mufla los factores que intervienen son el tiempo y la T°, en
la Filtración son el tamaño y en el Calor Húmedo son el tiempo, T° y presión.
La
eficacia de un proceso de esterilización depende de cómo se realice el proceso
en sí y de múltiples factores relacionados con el objeto: estructura física,
nivel de contaminación inicial, de limpieza, compatibilidad con el proceso de
esterilización, tipo de envoltorio, etc. Todas las fases de un proceso de
esterilización (limpieza, preparación del equipo, esterilización, almacenaje y
transporte) deben validarse y controlarse.
Factores
relacionados con el objeto
El
proceso de esterilización supone un reto importante para el material con luces
o conductos largos o con espacios muertos. Para estos instrumentos será
necesaria la aplicación de prácticas específicas.
Nivel
de contaminación del objeto: presencia de materia orgánica y de microorganismos
.Pueden alterar y condicionar el proceso de esterilización y derivar al fracaso
del mismo. La presencia de proteínas protege a los microorganismos frente a la
acción de los agentes esterilizantes, específicamente los químicos. Con el fin
de eliminar la materia orgánica y reducir la carga microbiana (y garantizar con
ello la eficacia del proceso de esterilización), el material debe
descontaminarse previamente mediante una limpieza exhaustiva. Algunos autores
demuestran que después de una limpieza minuciosa de material de difícil acceso
contaminado artificialmente (fibroscopios, agujas espinales, catéteres,...) se
logra una reducción microbiana de entre un 99.90% y un 99.99%.
Configuración
física del material:
Los
avances científicos en el diagnóstico y tratamiento de las enfermedades han
desarrollado una gran diversidad de material crítico con distinta forma,
tamaño, complejidad, fragilidad y sensibilidad. En función de su estructura y
configuración física se elegirá un determinado procedimiento de esterilización.
En
el Real Decreto 414/1996 del 1 de Marzo, transposición de la Directiva
1993/42/CEE, se regulan y clasifican los productos sanitarios; en él se
especifica la responsabilidad del fabricante de describir las condiciones
requeridas para reprocesar el material, sin modificar su funcionalidad y
características. El profesional sanitario tiene la responsabilidad de aplicar
el proceso de esterilización más adecuado y demostrar que puede reproducirlo
exactamente.
Limpieza
del material previa a la esterilización:
El
proceso de limpieza se define como la aplicación de un procedimiento
físico-químico encaminado a eliminar la suciedad y otros materiales ajenos al
objeto. La limpieza previa de un objeto es una práctica indispensable para
garantizar la efectividad de un proceso de desinfección o esterilización. El
agua y los detergentes usados en la limpieza deben reunir unas características
determinadas.
Agua
Es
importante verificar la calidad del agua para conseguir la máxima eficacia del
detergente. Un agua dura puede disminuir su efectividad. Para evitar la
corrosión del instrumental quirúrgico se recomienda la utilización de agua
desmineralizada durante el proceso de limpieza o, como mínimo, en el último
aclarado. Nunca debe utilizarse suero fisiológico para limpiar y/o aclarar el
instrumental porque puede producir corrosión. Es también importante controlar
la temperatura del agua, que no ha de ser excesivamente elevada (entre 20ºC y
45ºC); temperaturas altas favorecen la coagulación de la albúmina y dificultan
su eliminación.
El
detergente
Los
detergentes neutros (pH 7) están indicados para la limpieza de instrumental
quirúrgico delicado, pero son menos eficaces para la eliminación de sustancias
orgánicas. Algunos sistemas automatizados de lavado de instrumental utilizan
detergentes ligeramente alcalinos (pH de 8 a 11) que se neutralizan
posteriormente en el aclarado. Se ha demostrado que los detergentes enzimáticos
son más efectivos que los detergentes alcalinos para la limpieza del material
de difícil acceso. Su eficacia está relacionada con el hecho de contener
endopeptidasas, enzimas que hidrolizan los enlaces de la molécula proteica y
facilitan así la eliminación de contaminantes de base proteica como sangre y
secreciones.
Cuando
se utilice un detergente en polvo hay que tener la precaución de disolverlo
previamente, ya que podría obstruir canales o iniciar un proceso de corrosión
si alguna partícula quedase incrustada en alguna ranura del instrumental. Deben
evitarse los detergentes espumantes porque dificultan el contacto del
detergente con el objeto. Los detergentes deben diluirse correctamente según
las indicaciones de cada fabricante.
2.2.3 TIPOS DE ESTERILIZACIÓN
2.2.3
TIPOS DE ESTERILIZACIÓN
Los
métodos de esterilización pueden ser de 3 tipos:
Por
destrucción total de microorganismos;
Por
muerte o inactivación; y
Por
eliminación con medios físicos.
Por
destrucción total se entiende un proceso muy violento, que casi siempre implica
calentamiento apreciable del material, como ocurre con la aplicación de una
llama, que es lo que hacemos en el laboratorio cuando flameamos un ansa de
platino o las bocas de tubo de ensayo o erlenmeyers. Otra manera de destruir
contaminantes es con el uso de poderosos agentes oxidantes. Por supuesto ésta
metodología, aunque es efectiva, está muy restringida en su empleo.
La
muerte o inactivación significa la eliminación de microorganismos sin que
exista necesariamente desintegración de las células. Se puede efectuar por
calentamiento, seco o húmedo, por radiaciones o por agentes químicos. El calor
húmedo, generalmente en forma de vapor bajo presión, es muy útil y de gran
valor en la esterilización en el laboratorio, que se efectúa en autoclave, o en
la industria cuando se esterilizan los medios de cultivo y los equipos de
fermentación. En el caso de los autoclaves, se pueden alcanzar presiones de 1 a
3 atmósferas. En escala grande el equipo de producción es esterilizado con
vapor saturado bajo presión, y la presión requerida debe ser alcanzada en todas
las partes del equipo y el aire debe ser purgado totalmente del sistema (como
ocurre también en el caso de los autoclaves) porque la transferencia de calor
disminuye mucho en ese caso. Después de la esterilización se mantienen las
condiciones asépticas, haciendo pasar vapor por las válvulas y sellos.
La
eliminación física está restringida a la esterilización de gases líquidos, y es
fundamentalmente llevada a cabo por filtración mediante filtros absolutos o
filtros fibrosos.
Los
filtros absolutos son de materiales cerámicos, de vidrio o de metal sinterizado
con poros tan pequeños que la penetración de los microorganismos no es posible.
Los
filtros fibrosos no son absolutos y el material filtrante puede ser lana de
vidrio, amianto y esteres de celulosa, siendo las fibras de un diámetro
variable de 0.5 a 15 micrones.
Esterilización
por calor:
El
calor es el método de elección para esterilizar el material de laboratorio
resistente a las altas temperaturas. La temperatura y el tiempo requeridos para
esterilizar un material dependende que se esté utilizando calor seco o calor
húmedo.
Esterilización
con calor seco: La acción bactericida del calor seco se debe a la oxidación
física de un procedimiento lento o coagulación de la proteína bacteriana por
quemadura. En ausencia de humedad se necesita una temperatura más alta,ya que
en esta forma los microbios son destruidos al absorber el calor. Pueden ser dos
tipos:
Directa:
flameado o incineración más utilizada enlaboratorios y en algunos hospitales
pequeños.
Indirecto:
aire caliente u horno de Pasteur con temperatura de 160ºC a 180ºC por 1 a 2
horas siendoel más eficaz y seguro el eléctrico.
Esterilización
con calor húmedo: El calor húmedo es la forma de vapor saturado a presión es
eficaz para la destrucción de todas las formas microbianas, incluso espora. La
muerte de las bacterias es causada por la desnaturalización y coagulación de su
proteína o su sistema intercelular enzima-proteína. Estas reacciones son
catolizadas por medio del agua. Estas pueden de dos tipos:
Calor
húmedo discontinuo: algunos medios de cultivo que contiene carbohidratos como
lagelatina, leche, etc. no soportan temperaturas elevadas.
Vapor
a presión: conocido como autoclave, que posee todos los requisitos
indispensables comogrados de temperatura y tiempo de exposición, que junto con
el tamaño del autoclave y el flujo delvapor, la densidad y el tamaño de la
carga en la cámara aumentan la tasa se muerte de losmicroorganismos, en una
temperatura de 121ºC – 132ºC durante 15 minutos o más.
Esterilización
por radiación: La ionización por radiación genera iones al liberar electrones
de losátomos, estos se desprenden violentamente con átomos adyacentes y se une
a ellos, o bien se desprenden del segundo átomo. La energía liberada se
transforma en energía térmica o química la cual causa la muerte de los
microorganismos al romper la molécula del ADN e impide la división molecular y
la propagación de la vida. Las principales fuentes de radiación ionizante son
las partículas Beta y rayos gamma.
2.2.2. DEFINICIÓN
2.2.2. DEFINICIÓN
Esterilización:
Significa la eliminación de toda forma de vida de un medio o material, lo que
se lleva a cabo generalmente por medios físicos, por ejemplo, filtración, o por
muerte de los organismos por calor, productos químicos u otra vía. Esta
definición excluye por lo tanto cualquier técnica que resulte solamente en un
daño a los microorganismos o atenuación de la actividad de cualquier tipo.
Para
cultivar in vitro tejidos vegetales deben eliminarse todas las fuentes de
contaminación. El término esterilidad en este caso indicará que se han
eliminado todas las formas de vida excepto el material vegetal. En algunos
casos concretos también interesa que otros organismos convivan con el explante
(por ejemplo bacterias portadoras de determinados plásmidos durante un proceso
de transformación genética).
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